細(xì)菌懸浮稀釋液培養(yǎng)基微觀分析顯微鏡
夾層法
①取經(jīng)誘變處理洗滌過(guò)的細(xì)菌懸浮稀釋液0,1毫升(約含100個(gè)菌細(xì)胞)
加到預(yù)先制好的基本培養(yǎng)基平板上,再加熔化的瓊脂(2%)培養(yǎng)基,迅速
搖動(dòng),使細(xì)胞分散均勻
②置于適溫下培養(yǎng)到長(zhǎng)出明顯的菌落(淡水細(xì)菌1-2天就長(zhǎng)出菌落,海
洋細(xì)菌要3-5天或更長(zhǎng)時(shí)間)
③用墨水在培養(yǎng)皿的底部作長(zhǎng)出菌落的標(biāo)位。
④加上熔化的,冷至45°C左右的完全培養(yǎng)基約20毫升,待冷凝后,放于
適溫下培養(yǎng)
⑤再經(jīng)培養(yǎng)后新長(zhǎng)出的菌落多數(shù)是營(yíng)養(yǎng)缺陷型
⑥用接種針挑取新長(zhǎng)出的菌落,分別點(diǎn)種于基本培養(yǎng)基上并作完全培
養(yǎng)基斜面接種。如果經(jīng)適溫培養(yǎng)后在基本培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的那些菌落,
則可初步定為營(yíng)養(yǎng)缺陷型。其相應(yīng)的斜面接種物可供進(jìn)一步鑒定。
逐個(gè)檢出法將經(jīng)濃縮的營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌液稀釋接種于完全培養(yǎng)基上,在
適溫下培養(yǎng)。待長(zhǎng)出菌落,逐個(gè)挑取菌落,分別接種于基本培養(yǎng)基和完
全培養(yǎng)基上。凡是在基本培養(yǎng)基上不長(zhǎng)而在完全培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落
就可能是營(yíng)養(yǎng)缺陷型,可供進(jìn)一步鑒定
限制培養(yǎng)基法
此法也稱限量補(bǔ)給法。其方法如下
①在基本培養(yǎng)基中加入5%的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基或加0,01%蛋白胨
②將經(jīng)濃縮處理的菌懸液涂布接種于上述培養(yǎng)基中
⑧適溫下培養(yǎng),菌落長(zhǎng)得較快,較大的為野生型,長(zhǎng)得較小、較慢的菌
落可能是營(yíng)養(yǎng)缺陷型,留待進(jìn)一步鑒定如果只需要某種缺陷型,可在基
本培養(yǎng)基中加入微量的單一的某種氨基酸或堿基等。其補(bǔ)充量的確定
可先用已有的缺陷型測(cè)定。
營(yíng)養(yǎng)缺陷型的鑒定
其鑒定方法可分為以下兩步:第一步先在同一培養(yǎng)皿上測(cè)定許多缺陷
型對(duì)同一類型化合物的需要,具體方法如下:
①挑營(yíng)養(yǎng)缺陷型的新鮮培養(yǎng)物點(diǎn)種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上。
